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HPLC常见故障及排除方法
点击次数:1550 更新时间:2014-06-16
HPLC常见故障及排除方法:

色谱柱的维护

1.大多数反相色谱柱的pH稳定范围是2-7.5,尽量不超过该色谱柱的pH范围

2.避免流动相组成及极性的剧烈变化

3.使用预柱保护分析柱硅胶在极性流动相/离子性流动相中有一定的溶解度
4.如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相,应在实验完毕柱子冲洗干净,保存大乙腈中
5.流动相使用前必须经脱气和过滤处理


液相色谱仪色谱柱使用及维护
每天用足够的时间来平衡色谱柱,您就会在处理问题方面获得zui大的"补偿",而且您的色谱柱的寿命也会变得更长!------ 一定得做!
新的色谱柱在使用之前应该在您自己的液相色谱仪上进行性能测试,即使用色谱柱附带的检验报告上测试条件和样品来测定该色谱柱的柱效。并且,在以后的使用中,应时常对色谱柱进行测试。
卡套柱的安装不加预柱

1.将卡套架套入柱芯
2.
将两片夹套片嵌入柱芯的凹槽,使柱芯高于夹套
3.
将已套到柱芯上的卡套架向上推,直至高过夹套片
4.
将卡套帽和卡套架旋在一起,然后用手拧紧
5.
然后依同样的顺序连接好柱子的另一端
6.连接到液相色谱仪,PEEK接头手拧即可;若为不锈钢接头应使用扳手



注意:使用卡套柱时,两端的卡套应时刻连接在柱芯上。不管您是平衡色谱柱或是清洗,任何时候都不能将卡套取下来,否则会造成填料的流失。
卡套柱的安装加预柱
1.
将卡套架套入柱芯
2.将两片夹套片嵌入柱芯的凹槽,使夹套高于柱芯

3.
将已套到柱芯上的卡套架向上推,直至高过夹套片
4."子弹头"预柱放入卡套片内
5.将卡套帽和卡套架旋在一起,然后用手拧紧

6.
然后依同样的顺序连接好柱子的另一端
7.连接到液相色谱仪,PEEK接头手拧即可;若为不锈钢接头应使用扳手更换色谱柱滤网和玻璃棉过滤片同时可以修补色谱柱

 

注意:在取出反相柱芯的滤网和玻璃片之前,应该将色谱柱充分用水和甲醇/乙腈冲洗,而且修补工具的头部也应该蘸取少量的甲醇/乙腈,以避免在取出滤网和玻璃棉滤片时带出柱子内的填料。
1.将修补工具中的2套入柱芯的顶端
2.将修补工具中的3轻轻地旋入已套着2的柱芯中,并顺时针方向旋转到旋紧
3.一手握柱芯,另一只手轻轻地向外拉3,取出柱芯顶端的滤网
4.用一个小铲子轻轻地取出滤网下面的玻璃棉以及被污染的填料
5.将新的填料用甲醇润湿,然后填入挖去的部位,压平
6.装上新的玻璃棉滤网,并用修补工具中的4将玻璃棉压入柱芯顶端
7.柱芯顶端套上2,然后将滤网放入
8.压紧,然后取下2,再用4将滤网的边缘压平


平衡色谱柱 反相色谱柱在经过出厂测试后是保存在乙腈/水中的。请一定确保您所使用的流动相和乙腈/水互溶。由于色谱柱在储存或运输过程中可能会干掉,因此在用流动相分析样品之前,应使用10-20倍柱体积的甲醇或乙腈平衡色谱柱;如果您所使用的流动相中含有缓冲盐,应注意用纯水"过渡"

如何平衡色谱柱?
平衡过程中,将流速缓慢地提高
用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线缓冲盐或离子对试剂度如果较低,则需要较长的时间来平衡



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